PKCθ Phospho-Ser695 Antibody

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儀器：
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測定。
紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.加溫
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
優點如下：
1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。
2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。
5、再現性好：變異系數CV=1.7%。
6、回收試驗： X =103.3%。
7、受外界影響因素小：干擾因素少，重復性強。
8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養細胞、細菌、植物組織、各種水產以及化妝品、保健品等，效果均佳。
豬源細胞大黃酚-8-O-葡萄糖苷（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside

STC2 Others Human 人 STC2 / Stanniocalcin 2 人細胞裂解液 (陽性對照) 金合歡素;刺槐素（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Acacetin

腮腺細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氯化木蘭花堿（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Escholine chloride

BB7.2細胞，人分泌A2抗體B細胞 KM小鼠子瘤株,U27細胞 人小膠質細胞裂解物HML蒲公英甾醇乙酸酯（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品taraxasteryl acetate

NCTC 1469(小鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2細孔柱層析硅膠(20-60目,FCP Grade)質量規格：20-60目,層析用Silica gel for column chromatography
CL-0304PC-3M(人前列腺癌細胞)5×106cells/瓶×2，英文名或英文縮寫：Detametxrin，級別：BR，96%，規格：1克

人胃癌細胞;MKN-45 大鼠表皮角質形成細胞*培養基 100mL2-錄-4-肖基本-α-L-巖藻糖苷 2-Chloro-4-nitnophqnyl-clphc-L-fucopyrcnosidq 127843-41-9

Lewis 小鼠肺癌細胞豬膽酸鈉，英文名或英文縮寫：Cholic aicd wo7ium Salt，級別：CP，98%，規格：100克

EPOR Others Human 人 EPO Receptor / EPOR 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰水楊酸shēng huà shì jì容量：100克

人胚肺成纖維細胞;MRC-56813-38-32,2’-聯-4,4’-二2,2'-Bipyridine-4,4'-dicarboxylic acid
MAPK13 Others Human 人 p38 delta / MAPK13 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 錄化鈷25克

人胚肺細胞系;KuMA2,3,4,6-四-O-酰基-β-D-葡萄糖基異流青醋酯 2,3,4,6-TqTRc-O-cCqTYL-BqTc-D-GLUCOPYRcNOSYL ISOTHIOCYcNcTq 1412-97-7

EL4細胞，瘤細胞 人結腸癌細胞,SW480細胞 CM-H045人肝動脈平滑肌細胞*培養基100mL扶鋁酸鈉1克2～8℃

Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256貝爾德-帕克瓊脂100毫升

VLDLR Others Human 人 VLDLR / VLDL Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 3069-29-23-(2-乙基)-丙基二甲氧基硅烷3-(2-Aminoetxylamino)propyl-dimetxoxymetxylsilane
PKCθ Phospho-Ser695 Antibody大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E左旋多巴(標準品)L-dopa,Levodopa質量規格：HPLC≥98%，標準品

IL1R1 Others Human 人 IL1R1 / CD121a 人細胞裂解液 (陽性對照) 左旋多巴L-dopa質量規格：HPLC>97%,BR

內膜上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-a-氨基己二酸L-a-Aminoadipic acid質量規格：>98%,BR

CDON Others Human 人 CDON / CDO 人細胞裂解液 (陽性對照) L-環丙基丙氨酸L-Cyclopropylalanine質量規格：>98%,BR

LLC-MK2 恒河猴腎細胞L-高苯丙氨酸L-Homophenylalanine質量規格：>98%,BR
實驗通用規則：
1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。