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    糖原磷酸化酶b(GPb)測試盒微量法

    簡要描述:糖原磷酸化酶b(GPb)測試盒微量法公司正在出售的產品:布氏瓊脂進口、國產Brucella Agar250克彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗和純化培養布氏肉湯進口、國產Brucella Broth250克用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備紅四氮唑沙保羅進口、國產TTC-Sabourand,s Medium250克用于分離真菌,酵母菌等三苯四唑瓊脂基礎進口、國產TTC Agar Base250克彎曲桿菌

    • 產品型號:
    • 廠商性質:經銷商
    • 更新時間:2023-12-23
    • 訪  問  量:991

    詳細介紹

    注意事項:

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

    2、對照管只需要做一管。

    3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

    對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

    若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

    特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

    產品名稱:糖原磷酸化酶b(GPb)測試盒微量法

    產品規格:100管/48樣

    檢測方法:微量法

    產品貨號:BK-01S6984

    產品分類:糖原系列
    商品介紹:

    測定意義:

    糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylaseGPEC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個斷開α-14-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-16-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5-AMP)存在下可被激活。

    測定原理:

    GP催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5-AMP)時測定GPGPaGPb)活性,未添加腺苷酸(5-AMP)時測定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

    建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

    樣本和試劑浪費!

    1、樣本制備

    組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

    勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

     

    細菌/細胞樣本:

    先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

    4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

    QQ截圖20220307153537.png 

    實驗方法學:

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

    選擇抗凝的注意點:

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

    2 ug pBKS pBKS 低溫運輸,-20℃保存

    100mL DNEDTA溶液,0.5M,PH8.01   

    2 ug pFastBac-Dual pFastBac-Dual 低溫運輸,-20℃保存

    硫乙醇酸鹽流體(顆粒)  250g

    1瓶 Ca759細胞株 Ca759 低溫運輸和保存

    細菌總數顯色 Total Genes Chromogenic Medium 250g

    100U Sulfolobus DNA 聚合 IV Sulfolobus DNA Polymerase IV -20℃保存

    強化梭菌(RCM) Reinforced Clostridium Medium 250g

    200mL 自誘導液體(arab啟動子)  

    2 ug pOG2-cre pOG2-cre 低溫運輸,-20℃保存

    NT NT Medium 250g

    糖原磷酸化酶b(GPb)測試盒微量法TSPAN12/NET-2  四分子交聯體12抗體(四旋蛋白) 規格: 0.2ml

    FLT-3/CD135  FMS樣酪激3 規格: 0.2ml

    DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus)  穿膜蛋白DLK1抗體(C端) 0.1ml

    WIF1  Wnt信號抑制因子1抗體 規格: 0.2ml

    Goat Anti-human IgG/Cy3  Cy3標記的羊抗人IgG 規格: 0.1ml

    Cyclin L/CCNL1  周期素L抗體 規格: 0.2ml

    PLK4/STK18  絲/蘇蛋白激18 規格: 0.2ml

    C15orf41  15號染色體開放閱讀框41抗體 規格: 0.2ml

    Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771)  磷酸化磷酯Cγ1抗體 規格: 0.1ml

    EDNRB  內皮素受體B抗體 規格: 0.1ml

    phospho-Syntaxin 1a(Ser14)  磷酸化突觸融合蛋白1抗體 規格: 0.1ml

    NGAL/Lipocalin 2  脂質運載蛋白抗體 規格: 0.1ml 

     


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