水貂病毒性腸炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

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水貂病毒性腸炎病毒PCR檢測試劑盒說明書內皮脂肪酶抗體 規格： 0.1ml  英文名稱：Endothelial lipase

多發性外生骨疣樣蛋白3抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：EXTL3

軟骨外胚層發育不良相關蛋白抗體 規格： 0.1ml  英文名稱：EVC1

凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：Flightless 1

補體因子I輕鏈抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：Factor I light chain

FRMD8蛋白抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：FRMD8

叉頭蛋白E3抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：FOXE3

GATA結合蛋白2伴侶蛋白抗體 規格： 0.1ml  英文名稱：FOG2

磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3 規格： 0.1ml  英文名稱：Phospho-FLT3 (Tyr969)

Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：FNDC1

G蛋白偶聯受體GPR110蛋白抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：GPR110 protein

葡萄糖激酶調節蛋白抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：Glucokinase regulatory protein

骨形態形成蛋白拮抗蛋白抗體 規格： 0.1ml  英文名稱：Gremlin

谷胱甘肽S轉移酶θ2抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：GSTT2

G蛋白偶聯受體105抗體 規格： 0.2ml  英文名稱：GPR105

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。