反芻獸曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家

注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

兔子γ干擾素(IFN-γ)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子α干擾素(IFN-α)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子TH糖蛋白(THP)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子S100蛋白(S-100)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子D二聚體(D2D)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

反芻獸曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家人膠原吡啶交聯(lián) 96TPYD(Human Pyridinoline crosslinks) ELISA Kit

人內(nèi)皮脂肪酶 96TEL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit

人多聚ADP核糖聚合酶 96TPARP(Human Poly ADP ribose polymerase) ELISA Kit

人β葡萄糖醛酸苷酶 96TBetaGD(Human Beta-glucuronidase) ELISA Kit

人顆粒酶A 96TGzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit

人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型 96TAgtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit

人干擾素活化基因205 96TIfi205(Human interferon activated gene 205) ELISA Kit

人高香草酸 96T人高香草酸(HVA) ELISA Kit

人雄激素結(jié)合蛋白 96TABP(Human Androgen Binding Protein) ELISA Kit

人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白 96TSmIg(Human Surface Membrane Immunoglobulin) ELISA Kit

人抗凝血酶Ⅲ抗體 96THuman Anti-Thrombin III ,AT- III ELISA Kit

人切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1 96Thuman excision repair cross-complementation group 1,ERCC1 ELISA kit

人殺菌性/通透性增加蛋白 96THuman bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit

30%丙烯酰胺 100ml30％Acrylamide

蛋白抽提試劑盒-II (液體樣品蛋白抽提和回收) 50次提取

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。