禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

燕麥鐮刀菌 Gibberella avenacea球型芽孢桿菌 Bacillus sphaerious

鏈輪枝菌 Streptoverticillium sp.粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 規(guī)格： 1000ml 用途： 用于沙門氏菌的快速分離和鑒定。（GB4789.40-2010）

葡萄球菌屬 Staphylococcus sp.小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica

亮綠瓊脂培養(yǎng)基/Brilliant Green Agar沙門氏菌分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

亞酸胱氨酸增菌(SC) 規(guī)格： 100g 用途： 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。(GB18466-2005)

植物桿菌 Lactobacillus plantarum大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基/Lysine Decarboxylase Medium用于細(xì)菌賴氨酸脫羧酶試驗5克國產(chǎn)/進口

WI-38(人胚肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae植物桿菌 Lactobacillus plantarum

人膚肥大細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書溴百里香酚蘭  Bromothymol blue  624.38分子量： C27H28Br2O5S*：76-59-5

2--4--6-甲嘧  139.16  2- amino -4- -6-*：28840-64-4分子量： C5H9N5

異補骨脂查爾酮  ISO bavachalcone  分子量：*：

萘酚AS-BI硫鉀  Naphthol AS-BI potassium sulfate  分子量：*：78689

固綠FCF  Solid green FCF  808.91分子量：*：2353-45-9

無水二氫鉀  94.97  Anhydrous potassium dihydrogen phosphate*：14265-44-2分子量： O4P-3

2,7-二溴-9-(9-十七烷)咔唑  563.46  2,7- -9- (9- dibromo seventeen alkyl carbazole)*：955964-73-5分子量： C29H41Br2N

5-溴-2-硝吡  202.99  5- -2- nitro pyridine*：39856-50-3分子量： C5H3BrN2O2

活性橙16  Reactive Orange 16  分子量： C20H17N3Na2O11S3*：12225-88-6

樹脂天青  Resazurin  251.17分子量： C12H6NNaO4*：62758-13-8

7--1-甲-1,2,3,4-四氫喹啉  162.23  7- amino -1- methyl -1,2,3,4- four*：304690-94-6分子量： C10H14N2