禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

脫氧膽酸（牛或兔）/去氧膽酸/3α，12α-二羥-5β-膽烷酸/Deoxycholic acidBR，99%，10/100/500克國產/進口

牛津瓊脂基礎 規格： 100g 用途： 用于單核增生李斯特氏菌的選擇性分離(SN0184-2005)。

酸球菌 Lactococcus lactis中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

大鼠關節軟骨細胞*培養基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

CaES-17(人食管細胞)5×106cells/瓶×2

BDS培養基/BDS Medium擬桿菌的分離培養250克國產/進口

小鼠腸粘膜上皮細胞*培養基SW 780(人膀胱移行細胞)

RAG(小鼠腎腺細胞)CNE1, 人鼻咽細胞系

中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii少霉 Rhizopus arrhizus

桿菌屬 Lactobacillus sp.豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum

NIH3T3全細胞裂解大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書對甲氧偶氮  212.25  On methoxyazobenzene*：2396-60-3分子量： C13H12N2O

407有機載體  407 organic carrier  分子量：*：

2-氯-4-氟甲  144.57  2- -4- fluoride*：452-73-3分子量： C7H6ClF

4-咪唑  151.21  Imidazole 4- piperidine*：147081-85-4分子量： C8H13N3

氯[1,3-雙(2,6-二異丙)咪唑-2-亞]銅(I)  487.59  氯[ 1,3 -雙（2,6-二異丙）咪唑- 2 -亞]銅（我）*：578743-87-0分子量： C27H36ClCuN2

環己  160.26  Cyclohexyl benzene*：827-52-1分子量： C6H5C6H11

3-(三氟甲)吡  147.1  3- (three f) pyridine*：3796-23-4分子量： C6H4F3N

百部提取物  Hundreds of extracts  分子量：*：

環己氯鎂  Cyclohexyl chloride  142.91分子量： C6H11ClMg*：931-51-1

氘代芘  Deuterium substituted pyrene  212.31分子量： C16D10*：1718-52-1

精吡氟禾草靈  Fluazifop-p-butyl  383.36分子量： C19H20F3NO4*：79241-46-6

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。