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    PCR檢測(cè)試劑盒的檢驗(yàn)方法介紹

    更新時(shí)間:2021-12-22      點(diǎn)擊次數(shù):401
           PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。
      PCR檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)方法:
      1.試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
      (1)從冰箱中取出試劑盒,從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。
      (2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。
      (3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。
      2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))
      用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書操作。
      3.加樣
      在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5μL、終體積25μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品,終體積為25μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
      4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))
      取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。
      以上就是PCR檢測(cè)試劑盒的檢驗(yàn)方法,希望能對(duì)您有所幫助
      

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