?黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟

黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。

3結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎管狀上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎皮層上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基

人膀胱上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人膀胱平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基

人膀胱成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基

人尿道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基

人心房肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人心室肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人心肌成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基

人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

人臍靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基